心血管相關(guān)原代分離

　　原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞作為一種主要的體外研究模型，被廣泛應(yīng)用于心血管研究之中。常用于電生理、心肌損傷修復(fù)、心肌缺血再灌注損傷機(jī)制和藥物保護(hù)心肌的機(jī)制研究。我們經(jīng)過長(zhǎng)期嘗試，摸索出了一些行之有效的方法，能夠獲得純度高、活性好的原代新生大鼠、小鼠心肌細(xì)胞。

• 分離方法：
  新生大鼠或小鼠心肌細(xì)胞常用II型膠原酶消化法。例如，通過剪碎心臟組織后，用0.05% II型膠原酶預(yù)消化去除血細(xì)胞，再用0.1% II型膠原酶分階段消化（12分鐘+4分鐘），結(jié)合差速離心或Percoll密度梯度離心分離心肌細(xì)胞，存活率可達(dá)80%以上。成年心肌細(xì)胞則需優(yōu)化酶解條件，如添加布雷他汀（Blebbistatin）以抑制收縮損傷，提高活力和電生理特性。

• 關(guān)鍵優(yōu)化：

• 鼠齡選擇：新生1-3日齡乳鼠心肌細(xì)胞增殖能力較強(qiáng)，分離后貼壁快、存活率高；成年心肌細(xì)胞需更精細(xì)的酶解流程。

• 培養(yǎng)基與基質(zhì)：MEM培養(yǎng)基結(jié)合層粘連蛋白基質(zhì)可維持心肌細(xì)胞形態(tài)和功能。

• 凍存技術(shù)：優(yōu)化冷凍保存液（如含DMSO和血清）可實(shí)現(xiàn)66%以上的細(xì)胞回收率，且功能損傷極小。