原代細胞分離實驗服務步驟

1. 取材與預處理

• 組織獲取：需無菌操作快速獲取新鮮組織（如肝臟、心肌等），避免機械損傷和干燥。例如，肝細胞分離需麻醉大鼠并進行肝臟灌流；骨髓細胞需剪開小鼠下肢并沖洗骨髓

• 組織處理：剪碎組織至1-3 mm3小塊，便于后續(xù)消化。

1. 細胞分散

• 酶消化法（常用）：使用胰蛋白酶、膠原酶等消化細胞外基質(zhì)，釋放單個細胞。不同組織需調(diào)整酶濃度和作用時間（如小鼠腎臟需嚴格控制消化時間）。

• 機械法：通過剪切、研磨或擠壓分散組織，適用于堅硬組織（如心肌）或纖維少的組織（如腦組織）。

• 懸浮離心法：低速離心分離血液或腹水中的細胞，利用密度差異分層收集。

2. 純化與培養(yǎng)

• 梯度離心/差異貼壁：去除雜質(zhì)細胞（如紅細胞）或利用貼壁速度差異純化目標細胞（如心肌細胞）。

• 培養(yǎng)條件：使用含生長因子（如EGF、bFGF）的培養(yǎng)基，并根據(jù)細胞類型調(diào)整血清濃度（如軟骨細胞需低濃度胎牛血清）。

原代細胞分離實驗服務常用方法及適用性

注意事項

1. 無菌操作：全程在超凈臺中進行，避免污染。

2. 酶活性控制：預實驗確定最佳酶濃度和作用時間，消化后需用含血清培養(yǎng)基終止反應。

3. 細胞活力檢測：使用臺盼藍染色法評估細胞存活率（如原代肝細胞需活力＞85%）

1. 。

2. 標準化培養(yǎng)：不同實驗室條件差異可能影響結果，需統(tǒng)一培養(yǎng)基和傳代流程。

技術改進與創(chuàng)新

• 快速消化法（RD法） ：將軟骨細胞分離時間從12-16小時縮短至3小時，提高存活率和增殖活性。

• 改良培養(yǎng)基：添加維生素C或PLGA納米顆粒，減少血清依賴并維持細胞功能。

• 3D培養(yǎng)技術：結合酶消化法分離細胞后，模擬體內(nèi)環(huán)境進行三維培養(yǎng)，提升研究真實性。